《武汉工程大学学报》  2011年01期 19-21   出版日期：2011-01-30   ISSN:1674-2869   CN:42-1779/TQ
复方止咳颗粒中盐酸麻黄碱含量的测定


0引言复方止咳颗粒由枇杷叶、甘草、盐酸麻黄碱等药味组成,具有清肺止咳,化痰消炎的功效,是新开发的六类中药新药［1］.为有效控制本品的内在质量, 特对其中唯一的一味化药成分盐酸麻黄碱进行含量测定.本试验以盐酸麻黄碱为检测指标,建立了复方止咳颗粒中一种有效成分的含量测定方法.由于本品的特殊性——盐酸麻黄碱是制粒前直接加入,故本试验中盐酸麻黄碱的提取方法非常简便可行,直接选用合适的溶剂溶解即可.在流动相的选择上,由于本品种中药成分较多,成分复杂,故流动相中磷酸二氢钾的浓度、加入三乙胺及磷酸调节pH值是通过反复摸索,比较分离度、峰形等因素而确定.结果表明,本试验选用的流动相分离效果好,基线平稳,值得借鉴.1实验部分1.1仪器与试药 HP1100型高效液相色谱仪(G1311A四元泵,G1379A脱气机,G1316A柱温箱,G1313A自动进样器,G1314A紫外检测器)、N2000色谱工作站.盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号：171242200405）;复方止咳颗粒（红桃开技术中心提供,批号20100301～20100603）,乙腈为色谱纯,水为双蒸水,其余试剂均为分析纯.1.2实验方法
1.2.1色谱条件与系统适用性试验［23］色谱柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：乙腈-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（含0.4%三乙胺,磷酸调pH至2.7）;检测波长：210 nm;柱温：30 ℃;进样量20 μL.
1.2.2对照品溶液的制备［46］精密称取盐酸麻黄碱对照品适量,加0.5 mol·L-1的盐酸溶液制成每1 mL含20 μg的溶液,即得.
1.2.3供试品溶液的制备精密称取本品1.5 g,置25 mL量瓶中,加入0.5 mol·L-1盐酸溶液至刻度,摇匀,0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得.
1.2.4阴性样品溶液的制备取不含盐酸麻黄碱的处方药材,按照复方止咳颗粒的制备工艺,制成不含盐酸麻黄碱的阴性样品,再按“1.2.3”供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液.2结果与讨论
2.1线性关系考察［78］精密吸取盐酸麻黄碱对照品适量,加0.5 mol·L-1的盐酸溶液制成每1 mL含盐酸麻黄碱0.5 mg的对照品溶液.精密吸取对照品溶液1 mL 5次,分别置100、50、25、10、5 mL量瓶中,加0.5 mol·L-1的盐酸溶液稀释至刻度,摇匀.按正文色谱条件测定峰面积.分别吸取20 μL进样,以峰面积为纵坐标,进样量（μg）为横坐标进行线性回归,计算标准曲线的回归方程为y=35 839x-16 656,R=0.999 8.结果表明：盐酸麻黄碱在0.1～2.0 μg范围内,峰面积与进样量有良好的线性关系.2.2阴性对照试验取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液,按上述色谱条件分别进样,测定图谱显示,样品溶液的盐酸麻黄碱保留时间为19.365 min,而阴性样品没有检测到.结果表明,阴性对照无干扰,如图1所示.A.对照品HPLC色谱图B.样品HPLC色谱图C.阴性HPLC色谱图
图1对照品、样品溶液、阴性溶液的HPLC图
Fig.1HPLC of the reference stadards, sample solation and negative solution第1期王玉巧,等：复方止咳颗粒中盐酸麻黄碱含量的测定
武汉工程大学学报第33卷
2.3精密度试验取同一对照品溶液,连续进样六次,每次进样20 μL,平均峰面积值699 538.4,RSD为0.89%.表明精密度良好.具体结果见表1.表1精密度试验结果
Table 1Results of precision tasts编号峰面积值平均值RSD值（%）1702 545.22709 911.83694 739.8699 538.40.894700 955.75695 458.36693 619.72.4稳定性试验取同一供试品溶液,于0、2、4、8、12 h分别进样20 μL.结果RSD为0.61%,表明样品溶液在12 h内稳定.具体结果见表2.表2稳定性试验结果
Table 2Results of the stability tests时间/h峰面积值平均值RSD值/%0471 680.42473 419.84472 094.2473 679.60.618472 502.812478 700.82.5重复性试验 取同一批号样品（批号：20100501）6份,按供试品溶液制备方法制备,依法测定,结果盐酸麻黄碱平均含量0.273 mg·g-1,RSD为1.5%.表明试验重复性良好.结果见表3.表3重复性试验结果
Table 3Results of the repeatability tests次数取样量/g峰面积值含量/
（mg·g-1）平均值/
（mg·g-1）RSD值/
%11.466 4545 997.70.27621.513 9561 631.60.27531.300 9472 073.90.2690.2731.541.255 9460 827.00.27251.296 5486 215.70.27861.254 6453 588.40.2682.6回收率试验取已知含量的样品约0.6、0.75、0.9 g各三份,精密称定,分别加入盐酸麻黄碱对照品溶液（含量0.083 5 mg·mL-1）2、2.5、3 mL,按上述样品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪,计算回收率.结果见表4.由表4可知,9份样品测定的回收率为99.0%～101.2%,平均回收率为1003%,RSD值为0.79%.该方法准确度高.表4回收率试验结果
Table 4Results of the recorery rate tests序号样品含量/
mg加入量/
mg实测值/
mg回收率/
%平均回收
率/%RSD/
%10.1840.1670.352100.6100.30.7920.1690.1670.338101.230.1710.1670.33799.440.2090.2080.419100.650.2070.2080.418101.160.2140.2080.42299.670.2500.2500.502100.680.2560.2500.509101.090.2250.2500.47399.02.7样品测定 取10个批号的复方止咳颗粒,按照供试品制备项下方法制备,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,按外标法计算含量,结果见表5.表5样品含量测定结果
Table 5Results of the sample content determination批号盐酸麻黄碱含量/（mg·g-1）标示含量/%201003010.27892.7201004010.28394.3201004020.27090.0201004030.28896.0201005010.27391.0201005020.27993.0201005030.27190.3201006010.28494.7201006020.26889.3201006030.25986.3由表5可知,10个批号复方止咳颗粒中盐酸麻黄碱的标示含量分别为86.3%～96.0%,考虑到制剂生产、贮藏等综合因素,在理论含量的基础上按±15%设定限度,暂定本品盐酸麻黄碱应为标示量的85%～115%.此外,对同一批样品选用如下制备方法进行优选.方法一：精密称取本品约3 g,加水溶解并稀释至50 mL,加入氯化钠6 g,碳酸氢钠1.5 g,用1 mol·L-1氢氧化钠溶液调pH值至10.5,用乙醚振摇提取5次,每次30 mL,合并乙醚液,蒸干,残渣用1 mol·L-1盐酸溶解至10 mL,摇匀,精密吸取2 mL,用流动相稀释至10 mL,摇匀,即得.方法二：精密称取本品1.5 g,置25 mL量瓶中,加入0.5 mol·L-1盐酸溶液至刻度,摇匀,0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得.上述方法制备的溶液按所选色谱条件注入高效液相色谱仪测定,方法一结果含量0.274 mg·g-1,方法二结果质量浓度0.277 mg·g-1.根据测定结果综合评价,两种提取方法结果相差不大,RSD＜2%,但方法二操作更省时、简便,且盐酸麻黄碱分离效果较好,故选方法二作为供试品溶液的制备方法.因此,本方法的建立有助于快捷、简便、准确测定复方止咳颗粒中盐酸麻黄碱的含量,为建立产品质量标准,提供可靠的数据支撑,为产品的检验,提供了较好的测定方法.